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ttp //detail.chiebukuro.yahoo.co.jp/qa/question_detail/q1449174269 キンキキッズ(堂本剛さん、堂本光一さん)の新曲「Family ~ひとつになること~」の歌詞とジャケット、 皆さんもう確認しましたか? いち早く歌詞、ジャケット公開。タイトル:Family~ひとつになること~。12月1日発売 - ライヴドアニュース http //20yearsafterlove.blog111.fc2.com/blog-entry-313.html
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25/Nov/2011 probeの解離定数を求める。 I am gonna determine Kd value. 2 units/ml Bc-PLC 2/5 units/ml Bc-PLC 2/5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 2/5*5*5*5*5*5*5 units/ml Bc-PLC 0 units/ml Bc-PLC At the same time, I am gonna determine real amount of DAG level by brigh and dyer method. 18/Nov/2011 SMの量におけるD609の影響をMDCK細胞で調べる。 Effect of D609 on SM level in MDCK cells 1)ctrl 2)SMase 3)3hour D609 incubation 4)6hour D609 incubation 5)20hour D609 incubation mCherry-lysenin conc is 50microg/ml. 1 30 3hour 4 30 6hour 6 00 20hour SMase 1 units/ml 10 min. After that, fixed. What I have to prepare is that HBSS and 3 % PFA Effect of DGAT inhibitor on DAG level in MDCK cells. 1microM A922500 was used for this experiment. 2pm Add A922500 start incubation 4pm Add A922500 start incubation 5pm DAG probe incubation. こんなかんじで 17/Nov/2011 Rat red blood cell experiment, At first, I did the experiment as follows 1)1U/ml Pc-PLC + 200times annexin V + 9*108 cell/ml result hemolysis within 4 min 2)0.1U/ml Pc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml result hemolysis within 5 min In this time, protocol was wrong. 3)real experiment 0.1U/ml Pc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml I get annexin V fluorescence but it is not for living RBL cells. At first, RBC was subjected to hemolysis, become ghost, and then become fluorescence. 4)0.1U/ml Bc-PLC + 40 times annexin V + 9*108 cell/ml RBC rarely give hemolysis and no fluorescence. And I tryed the experiment whether Bc-PLC makes DAG on the plasma membrane in RBC in a Bc-PLC conc. dependent manner. 1) 800 microl RBC (9*108 cell/ml) 2) Add DAG probe 24 microl here And 3)2microl 100 units/ml Bc-PLC was added to the 8 microl HBSS. 4)2microl of this solution was added to next tube, which has 8 microl HBSS. 5)this step is done one after another. this means that 5 time solution is gonna prepare. Next in each tube, 75 microl RBC solution was added and is incubated for 10 min @r.t. after that, fixed 6% (final 3%), and incubated for 15min. and spin down. こんな感じでやりましたよーん。 30/Oct/2011 D609の濃度 50microg/ml Offered as 5 mg (sc-201403) and 25 mg (sc-201403A) sizes Synonym O-Tricyclo[5.2.1.02,6]dec-9-yl dithiocarbonate potassium salt CAS Number 83373-60-8 Molecular Weight 266.5 Molecular Formula C11H15OS2K Purity 98% Physical Appearance Off-white solid Solubility Soluble in water (25 mg/ml) I used D609 with the concentration of 188microM 以下のものをやってみる。 Other experiments 1. living MDCK cells with alpha PMA and PMA 2. DAG probe calibration with Bc-PLC Bc-PLC 20 units/ml Bc-PLC 10 units/ml Bc-PLC 5units/ml Bc-PLC 0units/ml D609 3. fixed MDCK cells with SMase noSMase SMase SMase+D609 SMase+BcPLC 4. living MDCK cells with SMase + Bc-PLC 5. SM amount with SMase or nojirimycin 6. DAG amount with SMase or nojirimycin 111016 もう一度最後の実験 以下の実験を2回繰り返す。 それぞれについて10個の細胞をとる。 それでanalyzeして終わり。 Thinking about biological significance, I am gonna try this experiment as follows. 1. noSMase 2. SMase 3. SMase+D609 4. SMase+BcPLC 16/June/2011 Now I started to write the papers. But I have several experiments I have to do and I want to do. 1. test if the DAG which exist already on the membrane is abolished by incubated with D609. 2. I am gonna take beautiful data of cholesterol, DMS and NB-DNJ. SMS2がPC-PLCであるか否か?とういうことに関係するのですが、 D609処理した細胞で、ライセニンで染まるかどうかという実験を過去にラボでやった人はいらっしゃいますか? あと、SMS1およびSMS2が欠損したMEF-ZS2とSMS1もしくは、SMS2が発現させた細胞では、ライセニンで染めるとどのように違いがでますか? こちらについては、やっているのではないかと思い聴いて見ました。 And then I want to get the PC-PLC antibody. 20May2011 I am gonna do the experiment. I don t miss to write but in the previous experiment. UV was irradiated to MDCK cells for 1 min. 30 min, 1hour 2hout later, the cells were fixed and observed. 30min there is 30% cells in which DAG probe was translocated. But not so obvious. So I am gonna do 10 min incubation after UVB irradiation. Because some papers says that 10 min is more DAG. So, 1. UVB 10min 2. UVB D609 10 min 3. No UVB And then the previous experiment that when MDCK was fixed, DAG probe localized at the plasma membrane incubated with 12.5 Bc-PLC 10 min. So, I need to play around the concentration of Bc-PLC. 4. Bc-PLC 0 microunit/ml 5. Bc-PLC 0.1 microunit/ml 6. Bc-PLC 0.5 microunit/ml 7. Bc-PLC 1 microunit/ml 8. Bc-PLC 5 microunit/ml 9. Bc-PLC 12.5 microunit/ml And then, U73122 doesn t abolish ATP-induced DAG on the outer leaflet of plasma membrane. So, I suspect PAP-induced DAG. I am gonna use the propranolol. 10. ctrl 11. D609 12. D609+ATP 13. D609+ATP+propranolol At the same time, I am gonna use the MDCK cells expressing mGluR5 and bath application of glutamate. 14. ctrl 15. glutamate 06May2011 I gonna do the experiment about DAG flip in fixed cells. A. EYFP-C1AB and DsRed B. EYFP-C1AB and DsRed with 10mM MbCD + 12.5unit/ml BcPLC C. EYFP-C1AB and DsRed with 20microM Fumonisin B1 + 12.5unit/ml BcPLC D. EYFP-C1AB and DsRed with 50nM ISP1 + 12.5unit/ml BcPLC E. EYFP-C1AB and DsRed with 6 microM DMS + 12.5unit/ml BcPLC F. EYFP-C1AB and DsRed with 100 microM NB-DNJ + 12.5unit/ml BcPLC G. EYFP-C1AB and DsRed with Bc-PLC as ctrl H. EYFP-C1AB and DsRed with PMA 28Apr2011 How to irradiate UVB (290-320nm) 1. reduce the volume of medium, DMEM 100 microl. Go to program 2. Set 10 mJoules/cm2 for 1min 3. replace the medium with appropriate media. That s it. 27Apr2011 Now Francoise kindly decide the condition of UVB irradiation. So I am doing the following experiments under the condition. I will observe DG probe and PKCdelta antibody accumulation. 1. Ctrl(negative) Just MDCK cells. 2. Ctrl(positive) PMA 3. UBV and leave 30 min 4. UBV and leave 1 hour 5. UBV and leave 3 hour 7. UBV and leave 30 min with D609 (D609 nothing after UVB) 8. UBV and leave 1 hour with D609 (D609 nothing after UVB) 9. UBV and leave 3 hour with D609 (D609 nothing after UVB) 10. UBV and leave 3 hour with D609 (D609 still incubation after UVB) 11. no D609 12. D609+100microM ATP 13. D609+100microM ATP+1microM U73122 22Apr2011 Thinking about the experiment I have to do. 1. I can get PKCgamma antibody within next week. So I gonna do the following experiment. A. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed. B. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed with SMase. C. EYFP-C1AB, PKCgamma antibody, DsRed with SMase and D609. 2. check whether DAG flop is inhbited in the presence of U73122. Actually when I did this expeirment previously using 100 microM U73122, unexpectedly more bright fluorescence comes up. Maybe some artifact. So I gonna reduce the concentration of U73122. A. 100 microM ATP B. 100 microM ATP, 10 microM U73122 C. 10 microM ATP D. 10 microM ATP, 10 microM U73122 3. I am gonna observe the effect of MbCD, FumonisinB1, ISP1, DMS and NB-DNJ in fixed cells. A. EYFP-C1AB and DsRed B. EYFP-C1AB and DsRed with 10mM MbCD + 12.5unit/ml BcPLC C. EYFP-C1AB and DsRed with 10microM(?)Fumonisin B1 + 12.5unit/ml BcPLC D. EYFP-C1AB and DsRed with 50nM ISP1 + 12.5unit/ml BcPLC E. EYFP-C1AB and DsRed with 6 microM DMS + 12.5unit/ml BcPLC F. EYFP-C1AB and DsRed with 100 microM NB-DNJ + 12.5unit/ml BcPLC 07Apr2011 Thinking about discussion with Francoise. 1. I am giving Francoise MDCK cells. 2. I gonna show the paper I am preparing now. 3. I gonna give her D609, rottelin Reiko has. 4. I gonna give her the paper relationship with D609 and apoptosis, with rottelin and apoptosis, and MDCK and apoptosis, SMase and apoptosis. 25/Mar/2011 Thinking about biological significance, I am gonna try this experiment as follows. 1. noSMase 2. noSMase+U73122 3. noSMase+D609 4. SMase 5. SMase+U73122 6. SMase+D609 7. SMase+BcPLC 8. SMase+BcPLC+U73122 Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCepsilon-HA Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCepsilon-HA(dominega) Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCalpha-HA Express EYFP-C1AB, DsRed and PLCalpha-HA(dominega) 24/Mar/2011 And then, I found another contraversy. In IPS1 experiment, flip doesn t occure even though without SM. I need to do same experiment with SMase. 22/Mar/2011 I am gonna do the following experiments from the data I took on 15/Mar/2011. At first, 10 microM U73122 experiment doesn t work. So I am gonna do increase its concentration or decreases in ATP concentration. This experiment is very critical to say that the EYFP-C1AB fluorescence is caused by DAG drived from PI-PLC. 1. 100 microM ATP 2. 100 microM ATP, 100 microM U73122 3. 100 microM ATP, 100 microM U73343 4. 10 microM ATP 5. 10 microM ATP, 100 microM U73122 6. 10 microM ATP, 100 microM U73343 Another point I have to mention is that 24 hour incubation with U73122 did not give the difference in outer DAG signal compared to ctrl. This means that PI-PLC doesn t contribute to outer DAG. But, I can see PI-PLC dependent outer DAG sigal. So I want to make clear the signal from PI-PLC caused by ATP addition is transient or sustained. I guess this signal is transient. I am gonna do 10min, 30min, 1 hour, 2 hour. In some case I am gonna remove the ATP in the middle of reaction. 15/Mar/2011 I am gonna take reproduciblity. 1. MDCK Cameleon with ATP no D609 2. MDCK Cameleon with ATP with D609 3. MDCK control no D609 4. MDCK D609 only 5. MDCK D609 ATP 6. MDCK D609 ATP U73122 7. MDCK D609 ATP U73343 8. MDCK D609 ATP R59949 9. MDCK D609 ATP SMase 10. MDCK D609 PMA 11. MDCK D609 DiC8 12. MDCK C1AB inner no D609 13. MDCK C1AB inner no D609 ATP 14. MDCK C1AB inner D609 15. MDCK C1AB inner D609 ATP 16. MDCK mGluR no D609 17. MDCK mGluR D609 18. MDCK mGluR D609 Result Patially success. I got good result about that in the presence of D609 and ATP the DAG signal was detected, but no signal in the presence of D609 only. Of course, no D609 gives very bright fluorescence. But disappointed point is that U73112 did not inhibit the fluorescence which is caused by addition of ATP. Interpretation of it is due to week effect of U73122. I need to increase in concentration of U73122 or decrease of concentration of ATP. And then, the points I need to condider is that in the presence of U73122, which is 24 hours incubation, DAG signal did not decreases. But transient increase caused by inner DAG caused by ATP through PI-PLC is detected. How do I come to term with these. 09/Mar/2011 The idea to observe DAG flop. 1. no D609 2. ctrl 3. ATP 10 min 4. ATP U73122 10 min 5. ATP R59949 10 min 6. ATP SMase 10 min 7. PMA 10 min 8. DiC8 10 min 9. Inner C1AB ATP 10.Inner C1AB ATP 1. About 9 and 10, C1AB is transfected one day before. 2. 2-10 is incubated with D609 for 6 hours. 3. 1067microl(97times11)HBSS is prepared 4. 33microl C1AB is put, means total 1100microl 5. 100microl pick up. Number1 6. 4microl D609 is put, total 1004 microl 7. Divide in half 8. first half, 5 microl ATP is added. 9. 100 microl pick up. Number2. 10. From remaining 400microl, each 100 microl is taken, add 1 microl PMA(10microM) and 1 microl DiC8 (100microM).Number 7 and Number 8. 11. About second half, 4microl ATP is added. 12. 100microl is picked up, Number3. 13. 1 microl U723122(15microM), R59949(10microM) or 2microl SMase(1unit) is added to each 100 microl, Number 4,Number5 and Number 6. Result In some part it is works well. But I missed to enter D609 in the cell which was supposed to be in the presence of U73122. So I need to do again about U73122. And My concern is C1AB probe expressed into the cells localized to the membrane in the presence of only D609. I need to chech this is really real or not. And I would be better to confirm that P2Y2R stay on the surface on the plasma membrane, by doing measure increase in calcium concentration. c 04/Mar/2011 I prepared WR19L cells, lymphocyte. I am gonna do the following experiments. I am gonna add 10 microM PMA, 100 microM DiC8, 12.5 units/ml Bc-PLC, 10 microM C6-Cer mixed with EYFP-C1AB probe. Experimental procedure WR19Lcells were spind down and collected. Cells were in total 815 microl(163microl*5 in each)HBSS solution. Add 25microl 3.8mg/ml EYFP-C1AB. 2microl 1mM PMA, 1mM alphaPMA, 100mM DiC8, 8.5microl of 12.5unit/ml Bc-PLC are put in the 1.5 ml tubes in advace. 168microl solution containing EYFP-C1AB is added in each tube and incubate 10 min. 30micro 20% PFA is added and fix for 10 min. After that, spine down cells and remove supernatant. Add 50mM NH4Cl for 5min. Spine down and suck up supernatant. Add 100microl HBSS. Result I could do it! I can see brighter fluorescence in PMA than that in control.About DiC8, It seems that there is no difference compared to control.About Bc-PLC, I could see very bright fluorescence in the cells which is aggregated, indicating that DAG is important for membrane fusion. 04/Mar/2011 I prepared WR19L cells, lymphocyte. I am gonna do the following experiments. I am gonna add 10 microM PMA, 100 microM DiC8, 12.5 units/ml Bc-PLC, 10 microM C6-Cer mixed with EYFP-C1AB probe. Experimental procedure WR19Lcells were spind down and collected. Cells were in total 815 microl(163microl*5 in each)HBSS solution. Add 25microl 3.8mg/ml EYFP-C1AB. 2microl 1mM PMA, 1mM alphaPMA, 100mM DiC8, 8.5microl of 12.5unit/ml Bc-PLC are put in the 1.5 ml tubes in advace. 168microl solution containing EYFP-C1AB is added in each tube and incubate 10 min. 30micro 20% PFA is added and fix for 10 min. After that, spine down cells and remove supernatant. Add 50mM NH4Cl for 5min. Spine down and suck up supernatant. Add 100microl HBSS. 18/Feb/2011 I am gonna follow Malhotra s procedure. I prepared the liposomes as follows. 1. POPC only=60 2. POPC/PS=60/20 3. POPC/GM1=60/20 These liposome includes 2mol% Rhodamine-PE 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 3. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 4. Phodamin-PE(4nmol) Avanti 0.15 mM 28 microl 1. I diluted these liposomes in 666microl, 888microl, 888microl in each. This means that 300 microM liposomes. 2. I am gonna pick up 100 microl in each. 3. EYFPC1AB domain is 1 mg/ml I am gonna add 1microl into 100 microl. This means that 10 microg/ml. 4. About DiC8, I have 1M DiC8 now (DMSO). I am gonna dilute this solution 200 times(PBS(-)), this means 5mM. Add 1microl into 100 microl. I want to prepare as follow. A. POPC B. POPC+probe C. POPC+probe+DiC8 D. POPC/PS E. POPC/PS+probe F. POPC/PS+probe+DiC8 G. POPC/GM1 H. POPC/GM1+probe I. POPC/GM1+probe+DiC8 5. FRET mesurement.30 min incubation. excitation 488 nm emission 500-650nm 6. Flotation assay (I can only use 4 samples for ultracentrifugation) B. POPC+probe C. POPC+probe+DiC8 H. POPC/GM1+probe I. POPC/GM1+probe+DiC8 7. Normalize with fluorescence of liposomes. 8. Apply sample solution to SDS-Page. 9. Stain with GFP antiboly. 06/Feb/2011 I couldn t make liposomes previously in 03/Feb/2011. However, I leave these lipid films for 1 week in the room condition. This might cause some bad effect on these membranes. So, I gonna make liposome again with same condition with littele modification. Because previous study use fluorescence PE was used 2mol%. I am gonna increase the volume of Rhodamine-PE from 0.5 to 2 mol%. So, 1. POPC only 2. POPC/DAG=60/6 3. POPC/DAG/GM1=60/6/20 4. POPC/DAG/PS=60/6/20 5. POPC/PS=60/20 6. POPC/GM1=60/20 Phodamine-PE is inluded all 2 mol%. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PODG(0.033micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8 microl 3. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 4. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 5. Phodamin-PE(4nmol) Avanti 0.15 mM 28 microl So then, I am gonna prepare following. 1. Take 102 microl POPC and 196 microl PE. 2. Mix and take 42.6 microl each in 6 tubes. 3. 9.8microl DAG is added 2,3,4 tubes. 4. 1.1microl GM1 is added 3,6 tubes. 5. 0.5microl PS is added 4,5 tubes. result I try sonication extensivly. But didn t make liposomes containing DAG even though biophysical journal paper shows that they could make liposomes. 03/Feb/2011 Lipid filmes prepared in 20/Jan/2011 was voltexed. But 5,6 didn t make liposomes. 2,3,4 did but rim of glass tube have fluorescence lipids, I am afraid of phase separation of DAG on the glass tube. Only 1 made liposomes well. 20/Jan/2011 I did the experiment of 09/Jan/2011 But this experiment didn t work well. Even positive control didn t work well, which is same result of ctrl. Toshi-sensei said that the distance between fluorescent PE and EYFP-C1AB doesn t become close enough. So I am gonna give up this experiment. I am gonna do following expeiment. I will prepare following liposomes. 1. POPC only 2. POPC/DAG=60/6 3. POPC/DAG/GM1=60/6/20 4. POPC/DAG/PS=60/6/20 5. POPC/PS=60/20 6. POPC/GM1=60/20 Phodamine-PE is inluded all 0.5 mol%. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. PODG(0.033micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8 microl 3. PS(0.04microl)avanti 100721 2.3mM 0.45 microl 4. GM1(0.04micromol) sigma G7641 1mM 1.128 microl 5. Phodamin-PE(1nmol) Avanti 0.15 mM 7 microl So then, I am gonna prepare following. 1. Take 102 microl POPC and 49 microl PE. 2. Mix and take 21.6 microl each in 6 tubes. 3. 9.8microl DAG is added 2,3,4 tubes. 4. 1.1microl GM1 is added 3,6 tubes. 5. 0.5microl PS is added 4,5 tubes. 09/Jan/2011 I read a paper in which they made liposomes. I will modify a little bit. And I am gonna detect FRET signal. ex 488 nm, em 560 nm. 1.POPC/BODIPYPE(530/560)=60/0.6 2.POPC only (as ctrl) 3.POPC/PS/BODIPYPE(530/560)=60/6/0.6 (positive ctrl) 4.POPC/GM1/BODIPYPE(530/560)=60/6/0.6 5.POPC/GM1=60/6 (as ctrl) Each is divided into two samples. One is for ctrl. The other is for Bc-PLC addition. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. BODIPYPE(530/560)(0.004micromol) Molecular probe 1 mM 2microl 3. PS(0.02microl)avanti 100721 2.3mM 0.245 microl 4. GM1(0.02micromol) sigma G7641 1mM 0.564 microl 03/Jan/2011 I did the condition of 02/Dec. But this lipid mixture did not make liposomes more than previous condition. So Next thinking is that remove cholesterol. That menas that POPC/SM/DAG=60 20 10 and so on. And I did the experiment in which I see the effect of C1AB on cell growth. MDCK and HEK cells. I cultured HEK cells as following condition. cell concentration is 1.62*106 cells/ml. 10microl solution was added to 500microl medium. After that 10microl 3.8mg/ml C1AB was added. Ctrl is only 10microl 200mM imidazole buffer solution. About HEK cells, 3.0*105 cells/ml was prepared. 30microl this solution was added to 500microl DMEM solution. After that, 25microl 3.8mg/ml C1AB solution was added. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. brainSM(0.066micromol) avanti 860062C 31.4mM 2.1 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.033, 0.066micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8, 19.6 microl So, I made such liposomes. 1. POPC=60 2. POPC/DAG=60/5 3. POPC/DAG=60/10 4. POPC/SM=60/20 5. POPC/SM/DAG=60/20/10 6. POPC/SM/DAG=60/20/20 02/Dec/2010 It turns out that these lipid mixture I prepared in 30/Dec did not form liposomes. So, I asked Toshi-sensei how to make liposomes well. うえだくん、 コレステロールを増やせばうまくいくかも知れません。 POPC/SM/chol/DAG=60 20 60 10とか。 試してみてもらえますか? 小林 So I made liposome as follows. 1. POPC(0.2micromol) avanti 13.7mM 14.6microl 2. brainSM(0.066micromol) avanti 860062C 31.4mM 2.1 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.033, 0.066micromol) avanti 800815C 3.4 mM 9.8, 19.6 microl So, I made such liposomes. 1. POPC/SM/chol=60/20/60 2. POPC/SM/chol/DAG=60/20/60/10 3. POPC/SM/chol/DAG=60/20/60/20 30/Dec/2010 I prepared liposomes newly. SM was included because SM is important for distribution of DAG on the membrane. And then, I mimicked the outer leaflet of the plasma membrane. So, I used as follows 1. POPC(0.6micromol) avanti 13.7mM 43.8microl 2. brainSM(0.2micromol) avanti 860062C 31.4mM 6.3 microl 3. chol(0.2micromol) unknown 10.2mM 19.6microl 4. PODG(0.1, 0.2, 0.3,0.4 micromol) avanti 800815C 3.4 mM 29.4, 58.8,88.2,117microl So, I made such liposomes. 1. POPC/SM/chol=60/20/20 2. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/10 3. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/20 4. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/30 5. POPC/SM/chol/DAG=60/20/20/40 28/Dec/2010 EYFP-C1AB 1.77 mg/ml now (M.W=38,000) I took 3 microl this means 1.77 mg*3microl/1000microl=5.31 microg. So 5.31/38000=0.0001397micromol=0.1397nmol. 1 cell have 1 fmol DAG. glass base dish maybe has 10000 cells/1 well. So 1 fmol*10000=10pmol DAG. but outer DAG is less assume 1%. So 100fmol DAG. liposome 19mM DOPC 52.6microl this means 19 mmol/1000000microl*52.6microl=1micromol. 3.2mM DODG 12.5microl this means 3.2mmol/1000000microl*12.5microl=40nmol. These two are mixed, so 4%mol DAG. suspended in 200microl HBSS. 100microl picked up, means 500nmol PC 20 nmol DAG. vesicle contains two side, so 250nmol PC 10nmol DAG I did liposome experiment, but result is mysterious. In the presence of DAG in PC liposome, fluorescence light is brighter than that in the presence of only PC liposome. I think about this. Basically, I don t know what happen, but there is some hint. 1. cells were ripped off when both liposome was added, this means that PC works as detergent because I add a lot of liposome, 500 nmPC. So I need to reduce the amount of PC liposome. 2. In this experiment, I add 4mol% DAG in PC liposome. But other experiment, for example SM-lysenin, give 20mol% DM into PC liposome. So I can add more DAG, maybe at least 10%, possbly 20%-40%. As you know, If DAG included more, this membrane doesn t make a liposome. So I need to take care about it. Next time, I am goning to prepare the liposome, リポソームですが、1mMを1ml位用意して、 蛋白の濃度にもよると思いますが、 こちらの実験では、GFP-Lysの場合、 いつも、50倍希釈で染色しているので、 (1マイクロ/50マイクロPBS) 1マイクロに、50マイクロのリポソームを混ぜて、 37度で30分してから、それで染色していました。 1mMはかなり濃い濃度なので、タンパク質はすべて 結合すると考えています。 さっき探していた論文ですが、(準備中) For the preabsorption experiment, Dronpa-θ-D4 or Dronpa-NT-Lys was incubated with MLVs at 37°C for 30 min prior to apply them to HeLa cells. としか書いてありませんでした。 これで良いですか? 牧野 Reply Forward Reply |Ueda Yoshibumi to Asami show details Dec 17 (7 days ago) リポソームを作るとき、はじめに、クロロホルムに溶けた脂質を遠沈管の中に加えて、 窒素で飛ばしてからPBSなどを加えてベシクルにするんだよね? だいたい、クロロホルムに溶けた1mM脂質(例えばDOPC)を何μl位遠沈管に入れて乾かしていますか? それは脂質のストック濃度によると思います。 10mMの脂質ストックなら100ulだし、20mMなら50です。 それで乾いてから1mlのPBSをいれて、 最終濃度1mMリポソームが 1mlできるということです。 Show quoted text - Reply Forward Reply |Ueda Yoshibumi to Asami show details Dec 17 (7 days ago) 1mMだったら脂質を1ml入れているっていうことだね。 かなり多い量を加えているんだね! なるほど、わかりました。 Reply |Asami Makino to Ueda show details Dec 17 (7 days ago) でも、結局リポソームは50マイクロLとか使わないから、 1mlも作る必要ないと思う。 200マイクロでも作れば充分なんじゃないかな。 ただ、こちらにある脂質のストックはほとんど10mM以上あるので たくさんある脂質は少量はかり取るのが大変だから、 たくさん使ってもいいと思います。 Original Message ----- From Ueda Yoshibumi To Asami Makino Show quoted text - Sent Friday, December 17, 2010 3 31 PM Subject Re MLV なるほど、了解しました! So, I prepared vesicles. I use 10microg/ml YFP-C1AB to stain the cells. YFP-C1AB M.W. 38kDa=38,000 This means 0.000263micromol/ml I add 100microl, So total amount is 0.02nmol. I want to include DAG into the vescle And then, 1 cells has 1 fmol DAG. glass based dishes is maybe 10 pmol DAG.
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[iOS]神ツールを作るための神アプリ、MyScriptsがかなり便利 | ひとりぶろぐ http //hitoriblog.com/?p=5612 @hitoriblog さんによるアプリ紹介 [iOS]第1回 JavaScript実行開発環境MyScriptsの魅力を全力で伝えてみる | ひとりぶろぐ http //hitoriblog.com/?p=5676 @hitoriblog さんによるアプリ紹介 IAMASのGeekLabでMyScriptsのことを話してきました | ひとりぶろぐ http //hitoriblog.com/?p=6848 @hitoriblog さんによる詳しいプレゼン資料が掲載されています Teachme バックグラウンド監視 通知センターからの起動 スクリプトをSpotlightから検索する方法 MyScripts@WIKI内 スクリプトの起動方法 デフォルトスクリプトの使い方 4つのアクション
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nullposterior chieftains gossiped absorb Midwestern?paragraph schemed?handmaid responses severities.reds,[http //www.aonlinemortgage.com/# Sioux Falls ] http //www.aonlinemortgage.com/# advisers Holst Lucifer spite [http //www.mortgage-seattle-advisor.info/# Fla ] http //www.mortgage-seattle-advisor.info/# strikes Fiori [http //www.aonlinehomemortgage.com/# Ala ] http //www.aonlinehomemortgage.com/# Brandel plank senders SPARC wreak,[http //www.tohomemortgage.com/# Ga__ ] http //www.tohomemortgage.com/# milliseconds religion assemblies reuniting [http //www.aloanmortgage.com/# mrtg Loan Mortgage] http //www.aloanmortgage.com/# Parsons surety replying [http //www.ahomeloansonline.com/# Columbus ] http //www.ahomeloansonline.com/# vein summarizations?Cauchy.backside![http //www.aloanmortgageonline.com/# money ] http //www.aloanmortgageonline.com/# historian shrines programmability smokescreen initializer [http //www.goequityhomeloan.com/# Va__ ] http //www.goequityhomeloan.com/# midway 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Paul ] http //www.aonlinehomeloan.com/# preempt synchronization spellbound [http //www.ismortgages.com/# Ohio ] http //www.ismortgages.com/# brine Hun?[http //www.formorgage.com/# Iawa ] http //www.formorgage.com/# hexagonal missed,uttered entrap blasts [http //www.aonlineloanmortgage.com/# Wash ] http //www.aonlineloanmortgage.com/# Ashley!shirt proportion [http //www.ihomeequityline.com/# Home Equity Line Wisconsin ] http //www.ihomeequityline.com/# disapprove!complaining,interchangings undauntedly.Oldsmobile![http //www.mortgagefinancialplanning.com/# Billings ] http //www.mortgagefinancialplanning.com/# physical,inviting.dining.easiness [http //www.familyhomemortgage.net/# Nebraska ] http //www.familyhomemortgage.net/# serial casualties Lyons![http //www.low-mortgage-rate-4u.info/# FL__ ] http //www.low-mortgage-rate-4u.info/# cunning instinctively Whitmanizes [http //www.aonlinemortgageloan.com/# NM__ ] http //www.aonlinemortgageloan.com/# tossed tensing vagabonds tress [http 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TRIP MACHINE PhoeniX(激) 曲名 アーティスト フォルダ 難易度 BPM NOTES/FA(SA) その他 TRIP MACHINE PhoeniX DE-SIRE改 SN2 激16 (80-)160 403 / 1 STREAM VOLTAGE AIR FREEZE CHAOS 86 79 54 4 96 楽譜面(8) / 踊譜面(12) / 激譜面(16) / 鬼譜面(16) 属性 発狂(左右振り、渡り)、同時踏み、ソフラン(減速)、ラス殺し 譜面 http //eba502.web.fc2.com/fumen/ddr/sn2/trip_pho_8m.html 譜面動画 https //www.youtube.com/watch?v=OHyVOvIdd1s (x3.0, NOTE) プレイ動画 https //www.youtube.com/watch?v=BD50YAmlu38 (x?.?, NOTE) https //www.youtube.com/watch?v=Kcy0zhDhICg (x3.0, NOTE) 解説 BPM推移:160-80-160 随所に回る16分のステップでじわじわと体力を削られながら最後に左右振りラス殺し地帯に突入する。体力配分が重要な譜面。 -- 名無しさん (2009-09-11 21 57 24) 16の中ではクリアは簡単方、ずっとオンブレ激のラストの滝に、たまに8分同時3連が振ってきます。ラストの振り回しはゲージさえ保っていれば、死ぬことはないはず。 -- 名無しさん (2010-07-03 19 17 13) X以降のゲージなら、ラス滝はフルゲージで突入できれば上下の矢印をすべて無視してもクリア可能。 -- 名無しさん (2010-11-23 11 57 16) 名前 コメント コメント(私的なことや感想はこちら) 鬼のほうは同時踏みがほとんど無いため鬼の方がクリアが早かった。譜面の共通点も多いので試してみるといいかも。 -- 名無しさん (2009-09-11 21 58 22) 同時踏みが苦手で体力を削られて後半がキツイ。 -- 名無しさん (2009-09-20 01 50 03) ジャンプが踏めない時はUnrealで練習かなぁ? -- 名無しさん (2009-12-11 18 18 16) 鬼と併せて足16入門にドウゾ。 -- 名無しさん (2012-12-02 13 20 16) 道中足13相当。中盤から14、終盤が16と言ったところのいわゆるラス殺し。とくに部分部分の振り回しは少ないがアラビ並みなので注意。 -- 名無しさん (2013-02-04 14 38 11) ラストの振り回しはバー無しでまともに踏もうとすると激・鬼共に足17クラスの難度。挑戦レベルの場合はとにかく誤魔化すべし。 -- 名無しさん (2013-02-26 23 09 07) 最後の渡りがゴミがない綺麗な渡りで楽しい。 -- 名無しさん (2018-10-05 01 07 22) アストロゲイザーが15に落ちたので現行足16で初の緑フルコン。最後の振り回しも配置自体は素直なので体力が残ってればバー持ちならそこまで脅威ではないかと -- 名無しさん (2019-06-05 17 01 18) よし、次はバーなしでフルコンがんばってみよう -- 名無しさん (2019-06-05 23 10 31) ↑2ですが、バー無しだと最後の振り回し追いつきませんでした… -- 名無しさん (2019-06-15 09 55 53) ラストの振り回しで左右に吹っ飛んで落ちる…… -- 名無しさん (2019-11-02 19 45 29) 激 二連打取ったら体の向き変える、鬼 常に正面でカニ歩き -- 名無しさん (2023-08-09 18 07 35) フレア1ならラス殺しが適当でもクリア可能 -- 名無しさん (2024-09-16 08 05 30) 名前 コメント PV http //www.nicovideo.jp/watch/sm1820925 http //www.nicovideo.jp/watch/sm1820925
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このワードは、検索してはいけなかった言葉に登録されています。 登録タグ PC被害 偽警告 危険度5 検索してはいけなかった言葉 詐欺 非常識 【警告】詐欺サイトの為、検索する際は注意 yowwinnerprize.comというサイトがTOPにヒットする。 そのサイトはSafariで入ると詐欺サイトだという赤い警告画面が映るが、Chromeでは映らず、そのままアクセスしてしまう。 警告を無視してサイトに入ると、ビジターアンケートや偽のウイルス警告に飛ばされる。 gredでチェックするとフィッシング詐欺だという判定が出たため、絶対に個人情報を入力したりしないこと。 分類:PC被害、非常識 危険度:5 コメント サイトの手口は「ドメイン売り出し中に見せかけてクレジットカード番号を入力させる」、「ビジターアンケート(偽ウイルス警告)にリダイレクトする」の2通りあるっぽい -- rule 17 (2020-04-18 11 06 56) これは結構目にしたことがあります。同人サイトとかによく出るらしいので皆さん注意 -- 唐紅 (2020-04-18 14 13 19) すげぇ危険なワードが追加されたな -- なナス (2020-04-18 15 36 52) douse -- 名無しさん (2020-04-19 13 58 35) どうせいつもの偽警告やろwwwと高をくくっていたら全画面偽警告であと変な文字化けしたようなファイルをインストールしてこようとしたので注意です -- 名無しさん (2020-04-19 13 59 52) ちなみに、インストールされそうになるファイルのファイル名に使われている文字はZalgo文字といって、文字そのもののデータが大きいためクラッシュさせやすくなるから使われているのだと推測できる。FireFoxでこのサイトを開いた場合には、ブラクラが発動するため注意。Xで閉じようとすると更にウィンドウが開くyouareanidiot方式である。 -- FireFoxでアクセスは控えて (2020-05-21 16 30 08) なるほどZalgo文字。そのようなものがあるのですね。ありがとうございます。 -- 名無しさん (2020-05-24 23 40 01) よくアダルトサイトの高難易度の広告の×押せなかったら必ずこれに飛ぶからくそイライラする。これを交わすプロいずれか現れそう。 -- お前らの父 (2020-07-26 20 56 49) 何であんなiPhone 11 Pro推すの?? -- tt (2020-09-26 22 36 24) ビジターアンケートがこのwikiだと悪質すぎて良いサイトもこいつのせいで台無しになってるんじゃないかっていうレベル -- 海草ライト君 (2020-09-27 01 51 27) マカフィーの公式サイトにリダイレクトしたww -- 名無しさん (2021-04-28 00 54 03) 特別レポート:中居正広の最新の投資は、専門家に畏怖の念を抱き、大手銀行を恐怖に陥れた←こんなのが出たwww しかもマカフィー検知しなかったwww -- ムーシュ (2021-06-18 20 17 22) 何回も見たことあるわ・・ -- ヌガー (2021-08-22 12 01 09) ZALGOっていう文字化けみたいなみたいなファイルウイルス検査にかけたけど無害だったからお土産として持ってるww -- Believe115 (2022-01-19 09 14 02) 学校のパソコンでやったらフィッシングサイトがブロックされました -- 名無しさん (2022-02-11 17 33 36) ヒットしません -- 名無しさん (2022-02-16 12 48 52) ロボットでない場合は、[許可]をクリックします -- ▢I'm not a robot (2022-09-12 21 22 16) 学校のpcではcisco umblallaでブロックされた、、() pornhub見れるくせによぉ -- SuperNanasiManEX (2023-02-20 12 33 54) 似たようなサイトないんか -- 名無しさん (2023-08-16 05 19 42) 名前 コメント
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TRIP MACHINE PhoeniX(踊) 曲名 アーティスト フォルダ 難易度 BPM NOTES/FA(SA) その他 TRIP MACHINE PhoeniX DE-SIRE改 SN2 踊12 (80-)160 283 / 1 STREAM VOLTAGE AIR FREEZE CHAOS 60 52 110 4 39 楽譜面(8) / 踊譜面(12) / 激譜面(16) / 鬼譜面(16) 属性 左右振り、渡り、同時踏み、ソフラン(減速)、ラス殺し 譜面 http //eba502.web.fc2.com/fumen/ddr/sn2/trip_pho_8t.html 譜面動画 https //www.youtube.com/watch?v=yrcVVOxJt20 (x3.25, NOTE ※CLAP音合成) プレイ動画 https //www.youtube.com/watch?v=KDoN_jhAuGI (x2.0, NOTE) https //www.youtube.com/watch?v=8qQmDmKxo-c (x2.75, NOTE) 解説 BPM推移:160-80-160 連続同時踏みが非常に難易度が高くスコアが出にくい。特に、八分のリズムでの連続同時踏みは遠い配置でPARANOiA HADES並。 -- 名無しさん (2011-03-07 22 25 08) 8分同時2連だけでなく8分踏みの合間に頻繁に同時が来るので慌ててバランスを崩さないように。ジャンプで体力温存できないとラストの滝も12にしては相当厳しいので一気に落とされる可能性が高い。 -- 名無しさん (2012-02-09 03 09 34) 名前 コメント コメント(私的なことや感想はこちら) 結構渡りスキルが必要。 -- 名無しさん (2009-12-10 00 09 37) 四分よりも八分の矢印の方が多いんじゃないか?これ。 -- 名無しさん (2010-03-14 01 16 22) 何だかんだでハデス楽に匹敵する難しさだと思う。アンリアル踊よりもBPMが遅い分同時が遠いし -- 名無しさん (2012-02-10 01 56 10) アンリアルとトリフェニとパラリスと伝説(いずれも踊)は足12の危険範囲内だと感じた。下手な足13よりムズいだろこれ。 -- 名無しさん (2013-11-20 20 05 43) ↑伝説の踊は弱いぞ -- 名無しさん (2014-12-14 16 25 03) ユニバーヒルズの対象になってたから足12くらいなら死にはしないだろうと思ってプレイしたら爆死したwやっぱり地雷なのね -- 名無しさん (2014-12-22 02 34 56) 道中の8分の〆が遠めの同時だったり、8分同時渡りが2連とは言え実質ハデス(楽)よりも速かったり、とどめにラス殺しの捻り折り返し8分滝はAA(激)よりも速かったりとノート数以外は足12かこれ?と思えるほどのテクニカルてんこ盛り譜面。最低でも序盤と終盤に来る裏拍同時渡り地帯が体力&ゲージ回復と思える位の地力は欲しい。13クラス。 -- 名無しさん (2020-10-28 06 47 19) 準備運動もそぞろに選んだらなす統べなく死んだ。ラス殺しどころか道中も滝に挟まる同時が厳しすぎて足が動くのを拒否した。密度以外の全てが詐称と思えるくらい強い。 -- 名無しさん (2022-09-13 13 12 55) 名前 コメント PV http //www.nicovideo.jp/watch/sm1820925 http //www.nicovideo.jp/watch/sm1820925
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# SOME DESCRIPTIVE TITLE. # Copyright (C) 2021, PB'99 # This file is distributed under the same license as the NetworkX [Un # official Machine Translate] Japanese Doc package. # FIRST AUTHOR EMAIL@ADDRESS , 2021. # #, fuzzy msgid "" msgstr "" "Project-Id-Version NetworkX [Un official Machine Translate] Japanese Doc \n" "Report-Msgid-Bugs-To \n" "POT-Creation-Date 2021-06-25 23 18+0900\n" "PO-Revision-Date YEAR-MO-DA HO MI+ZONE\n" "Last-Translator FULL NAME EMAIL@ADDRESS \n" "Language-Team LANGUAGE LL@li.org \n" "MIME-Version 1.0\n" "Content-Type text/plain; charset=utf8\n" "Content-Transfer-Encoding 8bit\n" "Generated-By Babel 2.9.1\n" # ../../CONTRIBUTING.rst 4 # 🕷🕷🕷? msgid "Contributor Guide" msgstr "共同作成者ガイド" # ../../CONTRIBUTING.rst 7 msgid "Development Workflow" msgstr "開発ワークフロー" # ../../CONTRIBUTING.rst 9 # 🕷🕷🕷? msgid "If you are a first-time contributor " msgstr "初めての共同作成者の場合 " # ../../CONTRIBUTING.rst 11 msgid "" "Go to `https //github.com/networkx/networkx " " https //github.com/networkx/networkx `_ and click the \"fork\" button to" " create your own copy of the project." msgstr "`https //github.com/networkx/networkx https //github.com/networkx/networkx `_に行き、\"fork\"ボタンをクリックして、プロジェクトのコピーを作成してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 15 msgid "Clone the project to your local computer " msgstr "プロジェクトのクローンをローカルコンピュータに作成します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 19 # 🕷🕷🕷 upstream msgid "Navigate to the folder networkx and add the upstream repository " msgstr "NetworkXフォルダに移動し、上流リポジトリを追加します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 23 msgid "Now, you have remote repositories named " msgstr "これで、次の名前のリモートリポジトリが作成されました。" # ../../CONTRIBUTING.rst 25 # 🕷🕷🕷 upstream msgid "``upstream``, which refers to the ``networkx`` repository" msgstr "「上流」とは、「NetworkX」リポジトリを指す。" # ../../CONTRIBUTING.rst 26 msgid "``origin``, which refers to your personal fork" msgstr "あなたの個人的なフォークを参照する「起点」" # ../../CONTRIBUTING.rst 28 msgid "" "Next, you need to set up your build environment. Here are instructions " "for two popular environment managers " msgstr "次に、ビルド環境を設定する必要があります。2人の一般的な環境マネージャの手順を次に示します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 31 msgid "``venv`` (pip based)" msgstr "「venv」(pipベース)" # ../../CONTRIBUTING.rst 53 # 🕷🕷🕷 Anaconda msgid "``conda`` (Anaconda or Miniconda)" msgstr "「conda」(アナコンダかMiniconda)" # ../../CONTRIBUTING.rst 74 msgid "" "Finally, we recommend you use a pre-commit hook, which runs black when " "you type ``git commit`` " msgstr "最後に、``git commit`` 'と入力すると実行されるプリコミットフックを使用することをお勧めします。" # ../../CONTRIBUTING.rst 79 msgid "Develop your contribution " msgstr "コントリビューションを作成します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 81 msgid "Pull the latest changes from upstream " msgstr "アップストリームから最新の変更をプルします。" # ../../CONTRIBUTING.rst 86 msgid "" "Create a branch for the feature you want to work on. Since the branch " "name will appear in the merge message, use a sensible name such as " "'bugfix-for-issue-1480' " msgstr "作業するフィーチャーのブランチを作成します。ブランチ名はマージメッセージに表示されるので、「bugfix-for-issue-1480」のようなわかりやすい名前を使用してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 92 msgid "Commit locally as you progress (``git add`` and ``git commit``)" msgstr "進行中にローカルにコミットする(「git add」と「git commit」)。" # ../../CONTRIBUTING.rst 94 msgid "Test your contribution " msgstr "あなたの貢献をテストする " # ../../CONTRIBUTING.rst 96 msgid "Run the test suite locally (see `Testing`_ for details) " msgstr "テストスイートをローカルで実行します(詳細は`テスト`_を参照してください)。" # ../../CONTRIBUTING.rst 100 # 🕷🕷🕷 pull request msgid "" "Running the tests locally *before* submitting a pull request helps catch " "problems early and reduces the load on the continuous integration system." msgstr "プル要求を発行する前にテストをローカルで実行することにより、問題を早期に検出し、継続的な統合システムの荷重を削減できます。" # ../../CONTRIBUTING.rst 105 msgid "Submit your contribution " msgstr "コントリビューションを発行します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 107 msgid "Push your changes back to your fork on GitHub " msgstr "変更をGitHub上のフォークにプッシュして戻す " # ../../CONTRIBUTING.rst 111 msgid "" "Go to GitHub. The new branch will show up with a green Pull Request " "button---click it." msgstr "GitHubに移動します。新しいブランチには緑色のPull Requestボタンが表示されます。クリックしてください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 114 msgid "" "If you want, post on the `mailing list http //groups.google.com/group" "/networkx-discuss `_ to explain your changes or to ask for review." msgstr "必要に応じて、`mailing list http //groups.google.com/group/networkx-discuss `_に投稿して、変更内容を説明するか、レビューを依頼してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 118 msgid "" "For a more detailed discussion, read these doc `detailed documents " " gitwash/index ` on how to use Git with ``networkx`` " "(` https //networkx.org/documentation/latest/developer/gitwash/index.html `_)." msgstr "より詳細な議論については、以下を読んでください。doc 「NetworkX」(` https //networkx.org/documentation/latest/developer/gitwash/index.html `_)でGitを使う方法についての「詳細な文書 gitwash/インデックス 」。" # ../../CONTRIBUTING.rst 122 msgid "Review process " msgstr "レビュープロセス " # ../../CONTRIBUTING.rst 124 msgid "" "Reviewers (the other developers and interested community members) will " "write inline and/or general comments on your Pull Request (PR) to help " "you improve its implementation, documentation, and style. Every single " "developer working on the project has their code reviewed, and we've come " "to see it as friendly conversation from which we all learn and the " "overall code quality benefits. Therefore, please don't let the review " "discourage you from contributing its only aim is to improve the quality " "of project, not to criticize (we are, after all, very grateful for the " "time you're donating!)." msgstr "レビューア(他の開発者および関心のあるコミュニティメンバー)は、プルリクエスト(PR)の実装、ドキュメント、およびスタイルを向上させるために、PRに対してインラインおよび/または一般的なコメントを書き込みます。開発者で作業しているすべてのプロジェクトのコードがレビューされています。私たちは、それを私たちすべてが学ぶための友好的な会話とみなし、全体的なコードクオリティの利点を理解するようになりました。したがって、レビューによって貢献を思いとどまらせないでください。その唯一の目的はプロジェクトのクオリティを向上させることであり、批判することではありません(私たちは、すべてに続いて、あなたが寄付する時間に非常に感謝しています!)。" # ../../CONTRIBUTING.rst 134 msgid "" "To update your pull request, make your changes on your local repository " "and commit. As soon as those changes are pushed up (to the same branch as" " before) the pull request will update automatically." msgstr "プル要求を更新するには、ローカル・リポジトリで変更を行い、コミットします。これらの変更が(前と同じ分岐に)プッシュされるとすぐに、プル要求が自動的に更新されます。" # ../../CONTRIBUTING.rst 138 msgid "" "`Travis-CI https //travis-ci.org/ `_, a continuous integration service, " "is triggered after each Pull Request update to build the code and run " "unit tests of your branch. The Travis tests must pass before your PR can " "be merged. If Travis fails, you can find out why by clicking on the " "\"failed\" icon (red cross) and inspecting the build and test log." msgstr "`トラヴィス-CI https //travis-ci.org/ `_(継続的インテグレーションサービス)は、プルリクエストが更新されるたびにトリガーされ、ブランチのコードおよび実行ユニットテストが構築されます。トラヴィステストは、PRをマージする前に通過する必要があります。トラヴィスに障害が発生した場合は、「障害」アイコン(赤い十字)をクリックして構築ログとテストログを検査すると、その原因がわかります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 144 msgid "" "`AppVeyor http //ci.appveyor.com `_, is another continuous integration " "service that we use. You will also need to make sure that the AppVeyor " "tests pass." msgstr "`AppVeyor http //ci.appveyor.com `_は、私たちが使用するもう1つの継続的インテグレーションサービスです。あなたはAppVeyorのテストが通過することも確認する必要があります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 150 msgid "" "If the PR closes an issue, make sure that GitHub knows to automatically " "close the issue when the PR is merged. For example, if the PR closes " "issue number 1480, you could use the phrase \"Fixes #1480\" in the PR " "description or commit message." msgstr "PRが問題を解決する場合は、PRがマージされたときにGitHubが自動的に問題を解決することを認識していることを確認してください。例の場合、PRが問題番号1480を解決する場合は、PRの説明またはコミットメッセージに「Fixes#1480」というフレーズを使用できます。" # ../../CONTRIBUTING.rst 155 msgid "Document changes" msgstr "ドキュメントの変更" # ../../CONTRIBUTING.rst 157 msgid "" "If your change introduces any API modifications, please update " "``doc/release/release_dev.rst``." msgstr "変更によってAPIが変更された場合は、「doc/リリース/リリース_dev.rst」を更新してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 160 msgid "" "If your change introduces a deprecation, add a reminder to " "``doc/developer/deprecations.rst`` for the team to remove the deprecated " "functionality in the future." msgstr "変更によって廃止された場合は、「doc/開発者/非推奨.rst」に注意事項を追加して、今後廃止される機能をチームから削除するようにしてください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 166 msgid "" "To reviewers make sure the merge message has a brief description of the " "change(s) and if the PR closes an issue add, for example, \"Closes #123\"" " where 123 is the issue number." msgstr "レビュー担当者へ マージメッセージに変更の簡単な説明が含まれていることを確認します。PRが案件をクローズする場合は、例に対して「Clos#123」(123は案件番号)が追加されます。" # ../../CONTRIBUTING.rst 172 msgid "Divergence from ``upstream master``" msgstr "「上流マスター」からの乖離" # ../../CONTRIBUTING.rst 174 msgid "" "If GitHub indicates that the branch of your Pull Request can no longer be" " merged automatically, merge the master branch into yours " msgstr "プルリクエストのブランチを自動的にマージできないことがGitHubから示された場合は、マスターブランチをマージします。" # ../../CONTRIBUTING.rst 180 msgid "" "If any conflicts occur, they need to be fixed before continuing. See " "which files are in conflict using " msgstr "競合が発生した場合は、続行する前に修正する必要があります。次のコマンドを使用して、どのファイルが競合しているかを確認してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 185 msgid "Which displays a message like " msgstr "次のようなメッセージが表示されます " # ../../CONTRIBUTING.rst 192 # 🕷🕷🕷 conflicted/競合 msgid "Inside the conflicted file, you'll find sections like these " msgstr "競合したファイル内には、次のようなセクションがあります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 200 msgid "Choose one version of the text that should be kept, and delete the rest " msgstr "保持するテキストのバージョンを1つ選択し、残りのバージョンを削除します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 205 msgid "Now, add the fixed file " msgstr "次に、固定ファイル を追加します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 210 msgid "Once you've fixed all merge conflicts, do " msgstr "すべてマージの競合を修正したら、次の操作を行います。" # ../../CONTRIBUTING.rst 216 msgid "" "Advanced Git users are encouraged to `rebase instead of merge " " https //networkx.org/documentation/stable/developer/gitwash/development_workflow.html" "#rebase-on-trunk `__, but we squash and merge most PRs either way." msgstr "拡張Gitユーザーには`merge https //networkx.org/documentation/stable/developer/gitwash/development_workflow.html#rebase・オン・トランク `__ではなくrebaseを推奨しますが、ほとんどのPRはどちらの方法でも圧縮してマージします。" # ../../CONTRIBUTING.rst 222 msgid "Guidelines" msgstr "ガイドライン" # ../../CONTRIBUTING.rst 224 msgid "All code should have tests." msgstr "すべてコードにはテストがあるはずです。" # ../../CONTRIBUTING.rst 225 msgid "" "All code should be documented, to the same `standard " " https //github.com/numpy/numpy/blob/master/doc/HOWTO_DOCUMENT.rst.txt" "#docstring-standard `_ as NumPy and SciPy." msgstr "すべてコードは、NumPyおよびSciPyと同じ`standard https //github.com/numpy/numpy/blob/master/doc/HOWTO_DOCUMENT.rst.txt#docstring-standard `_に記録する必要があります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 228 msgid "" "All changes are reviewed. Ask on the `mailing list " " http //groups.google.com/group/networkx-discuss `_ if you get no " "response to your pull request." msgstr "すべての変更がレビューされます。プルリクエストに対して応答がない場合は`mailing list http //groups.google.com/group/networkx-discuss `_に問い合わせてください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 231 # 🕷🕷🕷 行末「インストールインストール」? msgid "" "Default dependencies are listed in ``requirements/default.txt`` and extra" " (i.e., optional) dependencies are listed in ``requirements/extra.txt``. " "We don't often add new default and extra dependencies. If you are " "considering adding code that has a dependency, you should first consider " "adding a gallery example. Typically, new proposed dependencies would " "first be added as extra dependencies. Extra dependencies should be easy " "to install on all platforms and widely-used. New default dependencies " "should be easy to install on all platforms, widely-used in the community," " and have demonstrated potential for wide-spread use in NetworkX." msgstr "デフォルトの依存関係は「要件/デフォルト.txt」にリストされており、エクストラ(つまりオプション)の依存関係は「要件/エクストラ.txt」にリストされています。新しいデフォルトとエクストラの依存関係を追加することはあまりありません。依存関係を持つコードを追加することを検討している場合は、最初にギャラリー例を追加することを検討する必要があります。通常、新しく提案された依存関係は最初にエクストラの依存関係として追加されます。エクストラの依存関係はすべてのプラットフォームでは容易に追加でき、広く使用されています。新しいデフォルトの依存関係はすべてのプラットフォームでは容易に追加でき、コミュニティでは広く使用されており、NetworkXで広く使用される可能性が実証されています。インストールインストール" # ../../CONTRIBUTING.rst 240 msgid "Use the following import conventions " msgstr "次のインポート規則を使用します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 249 msgid "" "Use the decorator ``not_implemented_for`` in " "``networkx/utils/decorators.py`` to designate that a function doesn't " "accept 'directed', 'undirected', 'multigraph' or 'graph'. The first " "argument of the decorated function should be the graph object to be " "checked." msgstr "関数が「指示された」、「無向」、「マルチグラフ」または「グラフ」を受け入れないことを指定するには、「NetworkX/ユーティリティ/デコレータ.py」のデコレータ「not_implemented_for」を使用します。装飾された関数の最初の引数は、チェックされるグラフオブジェクトである必要があります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 269 msgid "Testing" msgstr "テスト" # ../../CONTRIBUTING.rst 271 # 🕷🕷🕷 プル要求 msgid "" "``networkx`` has an extensive test suite that ensures correct execution " "on your system. The test suite has to pass before a pull request can be " "merged, and tests should be added to cover any modifications to the code " "base. We make use of the `pytest https //docs.pytest.org/en/latest/ `__ " "testing framework, with tests located in the various " "``networkx/submodule/tests`` folders." msgstr "「NetworkX」には、システムでの正しい実行を保証する広範なテスト・スイートがあります。テスト・スイートは、プル要求がマージされる前に通過する必要があり、テストは、コード・ベースへの変更をカバーするために追加される必要があります。私たちは「pytest https //docs.pytest.org/en/latest/ 」の「__テストフレームワーク」を利用しており、テストは様々な「NetworkX/サブモジュール/テスト」フォルダにあります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 279 msgid "To run all tests " msgstr "すべてテストを実行する手順は、次のとおりです。" # ../../CONTRIBUTING.rst 283 msgid "Or the tests for a specific submodule " msgstr "または特定のサブモジュールのテスト " # ../../CONTRIBUTING.rst 287 msgid "Or tests from a specific file " msgstr "または特定のファイルからのテスト " # ../../CONTRIBUTING.rst 291 msgid "Or a single test within that file " msgstr "または、当該ファイル内の1つのテスト " # ../../CONTRIBUTING.rst 295 msgid "" "Use ``--doctest-modules`` to run doctests. For example, run all tests and" " all doctests using " msgstr "doctestsを実行するには``--doctest-modules``を使用してください。例の場合は、次のコマンドを使用してすべてテストとすべてdoctestsを実行してください。" # ../../CONTRIBUTING.rst 300 msgid "" "Tests for a module should ideally cover all code in that module, i.e., " "statement coverage should be at 100%." msgstr "モジュールのテストは、理想的にはそのモジュール内のすべてコードをカバーする必要があります。つまり、ステートメントのカバレッジは100%である必要があります。" # ../../CONTRIBUTING.rst 303 msgid "To measure the test coverage, run " msgstr "テストカバレッジを測定するには、次のように実行します。" # ../../CONTRIBUTING.rst 307 msgid "" "This will print a report with one line for each file in `networkx`, " "detailing the test coverage " msgstr "これにより、「NetworkX」内のファイルごとに1つの線分を含むレポートが印刷され、テストの範囲が詳述されます " # ../../CONTRIBUTING.rst 320 msgid "Bugs" msgstr "バグ" # ../../CONTRIBUTING.rst 322 msgid "" "Please `report bugs on GitHub " " https //github.com/networkx/networkx/issues `_." msgstr "`GitHub https //github.com/networkx/networkx/issues でバグを報告してください`_." カウンタ: - 「プル要求」のような頻出する誤訳バグは、初回のみコメント。 -- しだ (2021-07-01 19 09 59) 名前 コメント